PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/04/27 23:49:06

PCR产物测序问题.
我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我最终是要拿到这个未知基因的全长.我想选择最长的目的条带去测序.最后用RACE扩增全长的时候就能省点力气.还有,可不可以直接胶回收纯化送去测序?省掉TA克隆.我的目的片段长度1300BP.没分了.

PCR 产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子.也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带.如果只是进行PCR产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了.问题就在于,如果出现双峰或者多峰,这个样品就白送了,什么也结果也没有.
特别你现在用的还是简并引物,本身目标就是为了能扩增出目标片段来,比较建议先做TA克隆,然后测序的时候,最好挑几个克隆去测,不要只送一个克隆.现在测序也不贵,这样一次测上几个克隆,也可以确认在扩增出来的片段中,是否只有一个分子,还是其实有多个不同序列的片段.
另外,长度选择的问题,既然设计了简并引物,就是要钓取目前序列还未知的基因,可以选择从长片段开始测序,根据这个结果再考虑短的片段是否需要再继续测序.只有拿到目标序列了,才能决定下一步采用什么方式来获得全长的基因片段.

PCR产物测序问题.我用简并引物扩增未知基因.设计了几对引物.都出现了目的条带.发现其中两对引物的产物长度比较长.因为我胶回收：雀式pcr第一对pcr引物扩增后 ,产物电泳得到两条带,那么我该切哪一条啊? 简并引物的pcr扩增我照文献报道的虾的一个基因的保守区的简并引物及其pcr的条件,试着扩增蟹的这种基因,死活扩不出条带. PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR,设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗? 为什么用pcr技术扩增目的基因不是用含碱基的核苷酸而是用引物,引物是什么东东,我高中的不要说的太复杂 PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在10 长pcr引物设计以及扩增条件关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗 PCR扩增目标基因,完全没有条带.是不是设计的引物太短?引物只有10个碱基和模板配对 PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kca 我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因.