pCAMBIA 1301这个质粒的启动子35s promter在多克隆酶切位点（MCS)的后面,我该把基因插入到哪个区段

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/08 02:36:19

pCAMBIA 1301这个质粒的启动子35s promter在多克隆酶切位点（MCS)的后面,我该把基因插入到哪个区段?
pCAMBIA 1301这个质粒的启动子35s promter在多克隆酶切位点（MCS)的后面,如果我双酶切Sac I 和Xba I 两个位点,把目的基因插入到它们之间,该基因会表达吗?（35s promter的方向是向右的,这有影响吗?）如果该基因插入到多克隆酶切位点上不表达,那为什么该质粒还要把多克隆酶切位点设置在35s promter之前呢?

1 除非你带上完整的启动子和终止子.35s promter是启动下游Gus基因的,而不是上游的序列.
2 该质粒用来表达你的目的基因时,你必须将完整的基因（启动子+CDS+终止子）一起导入到多克隆位点区；然后转化植物后,你可以通过Gus染色来检测阳性苗.另外你还可以用MCS区的酶切位点加下游的NcoI 或Bgl II双切,将35S启动子置换成你所研究的启动子,这是它主要的用途.
再问：那如果我的基因没有自带启动子的话，我想用该质粒自带的35s启动子来启动，切掉Gus基因，将它替换成我的目的基因，这样能够表达吗？？？非常感谢这位师兄啊！！！！
再答：当然可以，你可以用Nco Ｉ和BstE II 来将你的片段置换上去

pCAMBIA 1301这个质粒的启动子35s promter在多克隆酶切位点（MCS)的后面,我该把基因插入到哪个区段如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢是这样的,为什么标记基因能检测目的基因是否在成功插入到质粒上呢,如果那质粒上有抗青霉素基因,就算它没有被插入目的基因,把基因定位搜索一个人类疾病基因被定位在7号染色体一段140kb的区域内,并已分离到此染色体区段的克隆,但并不知道该基因定位采用通用引物对插入到质粒克隆载体中的基因片段进行测序,t3 引物读出来的数据是该基因的5'端还是3'端? 表达载体构建的问题.我要用PBI121做表达载体,用他上面的35S做启动子,那么我的插入目的基因的启动子是不是要和表达载假如目的基因插入了质粒的四环素抗性基因中,筛选含目的基因的细胞,这个质粒还含有抗氨苄霉素基因. RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢基因在诱导表达时,首先要把自己的启动子去掉,再换成诱导物的启动子吗? ,质粒上有四环素抗性基因和氨甸氢酶素抗性基因,把目的基因插入四环素抗性基因所在的位置,为什么还要用氨甸青霉素来检测? 人体蛋白质基因之所以能插入到羊的染色体插入时的工具用病毒为什么不可用质粒为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急