搜搜做题作业网请教关于构建cdna文库载体的问题 我需要能将导入的基因表达为蛋白的表达载体
来源：学生作业帮 编辑：搜搜做题作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/02 06:43:26
请教关于构建cdna文库载体的问题 我需要能将导入的基因表达为蛋白的表达载体
不知道p-bulescript XR可以不可以 它能表达外源基因吗 如果不可以 有莫有有经验的可以推荐个建库用表达载体呢?请求专业人士,非常感激啦,要是有人有吴乃虎的联系方式也可以告知,谢谢
不知道p-bulescript XR可以不可以 它能表达外源基因吗 如果不可以 有莫有有经验的可以推荐个建库用表达载体呢?请求专业人士,非常感激啦,要是有人有吴乃虎的联系方式也可以告知,谢谢
建库的话随便找个T载体就可以了,只要方便测序就好,至于要实现原核表达的话我个人建议您还是在完成测序后将表达框分离（PCR也好、酶切也好）,连接到原核表达载体,我个人推荐使用IPTG诱导、含有组氨酸标签的表达载体,这样也方便后期的纯化工作等.
当然如果想直接在普通的大肠杆菌中表达也是可以的,比如前一段时间我搞土壤DNA文库时就是直接将文库在含有筛选剂的极限培养基上筛,获得的克隆直接测序,得到了一个基因,当然其表达框前面不远处就是一个35BP的原核启动子,之后就将这个启动子加上个AGGAGG以及GFP基因的上游18bp序列做引物（上游刚好59bp再多一个都不是1.2元每个碱基了）,下游直接是GFP下游引物验证了一下功能.肯定能用的.你也可以试着这样原核表达.不过很冒风险.
再问： 您好，我不太明白您后面说的，是把载体改造了吗，加上了AGGAGG的RBS区吗 ，那是用什么载体改造的啊？？？
再答： T载体，现在合成引物也好，基因序列也好很便宜的，设计好序列交给公司合成就好了。出想法就好了。 AGGAGG是比较标准的RBS，前面随便叫个什么启动子就好，比如诱导性的T7当然需要DE3细胞，不然就找个大肠杆菌专用的启动子，随便哪个载体启动抗性基因的都可以，如果在这种小事上纠结就太无聊了。 如果你对质粒拯救技术了解的话就可以知道，现在大家都在任意组合ORI和各种抗性的原核表达框了，哪还有固定的模式了。 对了，你不是在站内信都问了吗？还有啊，构建C库你不打算测序吗？用软件分析先啊，要不然到时候要筛选上万条序列的，相当于反复构建了两遍以上的库。
当然如果想直接在普通的大肠杆菌中表达也是可以的,比如前一段时间我搞土壤DNA文库时就是直接将文库在含有筛选剂的极限培养基上筛,获得的克隆直接测序,得到了一个基因,当然其表达框前面不远处就是一个35BP的原核启动子,之后就将这个启动子加上个AGGAGG以及GFP基因的上游18bp序列做引物（上游刚好59bp再多一个都不是1.2元每个碱基了）,下游直接是GFP下游引物验证了一下功能.肯定能用的.你也可以试着这样原核表达.不过很冒风险.
再问： 您好，我不太明白您后面说的，是把载体改造了吗，加上了AGGAGG的RBS区吗 ，那是用什么载体改造的啊？？？
再答： T载体，现在合成引物也好，基因序列也好很便宜的，设计好序列交给公司合成就好了。出想法就好了。 AGGAGG是比较标准的RBS，前面随便叫个什么启动子就好，比如诱导性的T7当然需要DE3细胞，不然就找个大肠杆菌专用的启动子，随便哪个载体启动抗性基因的都可以，如果在这种小事上纠结就太无聊了。 如果你对质粒拯救技术了解的话就可以知道，现在大家都在任意组合ORI和各种抗性的原核表达框了，哪还有固定的模式了。 对了，你不是在站内信都问了吗？还有啊，构建C库你不打算测序吗？用软件分析先啊，要不然到时候要筛选上万条序列的，相当于反复构建了两遍以上的库。