实验设计：用大肠杆菌表达来源于动物细胞的某一氧化还原酶；

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/03 05:17:21

实验设计：用大肠杆菌表达来源于动物细胞的某一氧化还原酶；
“用大肠杆菌表达来源于动物细胞的某一氧化还原酶；并利用免疫荧光技术对细胞中的该蛋白进行定位.”
希望给一个详细点的实验设计,

1.先克隆该酶的cDNA全长,插入可在大肠杆菌内表达的载体进行表达.克隆的时候可以在末端加入标记,比如6-HIS等,以便于表达后的纯化
2.在大肠杆菌中表达
3.裂解细菌,利用亲和柱纯化蛋白.
4.用纯化后的蛋白免疫小鼠（或者兔子）,制备抗体
5.筛选抗体
6.培养表达该酶的动物细胞于玻片.固定,加制得的抗体孵育,洗片,再加荧光标记的二抗孵育（具体的孵育过程我就不详细写了）.用共聚焦荧光显微镜观察,就可以在细胞内定位了.

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