菌落PCR阳性,目的片段2300bp,假阴性可能性很小,但是我取菌涂板子后,竟然没长出来,

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/05/14 18:42:16

菌落PCR阳性,目的片段2300bp,假阴性可能性很小,但是我取菌涂板子后,竟然没长出来,
这是不是说明质粒跑到菌液去了?取菌扩大培养又可以明显看到菌扩增了?

有抗性吗?菌扩增,应该是重组质粒有转化进去的.
菌液PCR建议：
上游引物：选择载体上的一段序列
下游引物：选择目的基因的反向引物
这种假阳性可能性很小
再问：这样不就要重新设计引物了?我最大的问题是明明是从有抗性的培养基里挑出来的菌，但是重新涂板却长不出菌，难道质粒都跑到培养基里去了？
再答：你如果是从有抗性的培养基里挑出来的菌，做菌液PCR，出现假阳性的可能性非常之大。因为你用的引物是目的基因的特异性引物。所以建议你以后做菌液PCR，用我上述的引物去PCR，能P出来的几乎可以确定是阳性的。然后，你说挑出来的菌，液体培养基培养之后（是这个意思?），重新涂板却长不出菌，说明就是假阳性。还有一种可能，你构建的重组质粒没问题，但是转化时，感受态有问题，没转化成功~~ 望采纳哦~~

菌落PCR阳性,目的片段2300bp,假阴性可能性很小,但是我取菌涂板子后,竟然没长出来, 什么是菌落pcr假阳性革兰氏阳性菌PCR革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带. 大肠杆菌转化后做菌落pcr一直p不出带是怎么回事?麻烦高手指教下pcr体系及反应时的程序,目的基因大概1000bp PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在10 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 转化后挑取含有目的片段的单菌落摇菌扩增以后划盘子,几天后挑取部分菌落做PCR无带,不知是何原因? PCR扩增后的目的基因如何提取分离?对阳性克隆中的目的基因又如何提取分离? 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀在无菌培养基上接种大肠杆菌后长出来的大肠杆菌菌落能够成群落吗 pcr扩增目的片段时,在第几个循环后才能出现目的片段长度的双链DNA分子? 我跑出来的PCR目的条带很清晰,但是marker很暗,每个加样孔都一样的暗