RT-PCR中为何在逆转录结束后要让逆转录酶失活?

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/05/10 14:33:07

反转录酶在进行pcr反应前须进行高温失活,不然就会影响pcr扩增.
再问：可否具体说明一下如何影响pcr扩增的呢？如果反转录酶的操作底物是RNA，pcr扩增的是DNA，应该不会出现打架的情况吧。而且pcr的“变性”阶段也是高温，不是也可以使逆转录酶失活，这样单列这一步好像也显得多余了？
再答：逆转录酶有三种活性，1是以RNA为模板合成DNA，2以DNA为模板合成DNA，3水解RNA，但是一般市场上的逆转录酶反转录而成的cDNA是单链的，也有试剂盒可以按照要求合成双链的DNA。但是逆转录酶的保真性一般不高，而且效率较低，能合成的片段较短。 pcr的高温变性阶段可以失活逆转录酶的，如果直接往下做的话，逆转录酶失活那一步的确没什么必要。但是一般cDNA还是要放一段时间的，按照老规矩，失活吧。
再问：谢谢你的认真回复。但我的问题是“为什么要特别强调在进行PCR之前要使逆转录酶失活”，换言之，若在进行PCR之前逆转录酶没有失活，则后续步骤会受到影响。能否具体谈一谈会受到怎样的影响呢？谢谢！

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