SSR 分子标记技术的实验过程

来源：学生作业帮编辑：搜搜做题作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/06/13 12:09:34

SSR 分子标记技术的实验过程

1）找个公司合成引物
2）提取DNA
3）PCR扩增
4）电泳检测,不要用琼脂糖,要用丙烯酰胺凝胶,变性非变性均可,大板小板都行,但大板效果更好点,小板做起来比大板省点事.
5）显影,一般用银染,NaON和碳酸钠均可.
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下面给你粘一点我论文里的步骤：
1.2.\x09SSR引物
本研究SSR位点及其引物序列来自2011年发布的烟草高密度SSR遗传连锁图谱,在图谱中24个连锁群上按照间隔3~5cM的距离选取了位点并合成引物,共合成SSR引物697对,用于CMV标记筛选和遗传定位.
1.3.\x09DNA提取
采用天根™ DNA提取试剂盒提取供试材料全基因组DNA.
1.4.\x09PCR反应体系
PCR总反应体系为10µL,其中30~50 ng/µL DNA 模板1 µL,2×Mix 5µL,2µmol/L正反向引物混合工作液1µL,加ddH2O至10µL.所用试剂购自MBI.
PCR反应在96孔ABI Veriti梯度基因扩增仪上按以下程序运行：首先94°C预变性5min； 94°C 15s,55°C 15s,72°C 30s 32个循环；最后72°C延伸7min,4°C保存.
1.5.\x09电泳检测
完成PCR循环48h内,取2µL PCR产物在8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上恒电压850v电泳90min.用稍加改进的NaOH银染方法对电泳后的聚丙烯酰胺凝胶进行染色显影.各种溶剂的配方和体积为：银染液,0.1%AgNO3溶液1L；显影液,16g NaOH,8mL 37%甲醛,加去离子水定容到1L；终止液,0.75%Na2CO3溶液1L.银染程序为：（1）去离子水冲洗15s；（2）银染8min；（3）去离子水冲洗15s；（4）在显影液中轻摇至显带；（5）放入终止液,终止显影.显影完成之后,将聚丙烯酰胺凝胶放置在阴凉通风处3~4h,待完全干燥后,在透射式看片机上用数码相机采集图像.

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