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你是做蛋白结晶的吧,有没有什么经验能教教我这个什么都不会的啊?

来源:学生作业帮 编辑:搜搜做题作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/04/29 08:45:20
你是做蛋白结晶的吧,有没有什么经验能教教我这个什么都不会的啊?
你是做蛋白结晶的吧,有没有什么经验能教教我这个什么都不会的啊?
这个活很靠运气的啊,有的蛋白结晶很容易,有的做死也结晶不出来.
总之样品的准备很关键,要很纯才行,95%以上吧至少.
然后就是不停地试各种条件了.当然还要试不同长度的蛋白片断
再问: 蛋白纯度是绝对没问题的,我自己做纯化。什么柱子都有。关键是看要结晶是需要什么条件了。现在是什么流程都不知道啊,完全空白的
再答: 不好意思, 我很少很少上来看的, 所以现在才看到你的提问. 结晶的流程是很简单的: 1. 准备样品, 也就是要结的东东 2. 筛结晶条件, 碰运气. 我们一般向HAMPTON, QIAGEN买SCREEN, 那里面都是前人经常得到晶体的条件. 最常用的SCREEN有: CRYSTAL SCREEN 1&2, PEG/Ion 1&2, 每个SCREEN一般是48个条件 (10ml 每管, 可以用好久好久了). ~$300 一个SCREEN. 3. 从上面所说的商业SCREEN里看到小晶体了(我们称之为HIT), 除非你运气好, 初得到的晶体大多是很小或者不是单晶, 所以要你自己在那个条件附近优化, 最重要的变量是沉淀剂浓度, 样品浓度, pH. 做晶体没什么一定的东西, 可变的条件(盐浓度, 温度....)永远也试不完的, 只能多试, 当是多买几张彩票吧!!! 别忘了先用X-射线检测下是不是蛋白晶体, 要不然搞了半天是盐的晶体就白忙活啦. 4. 拿到很好的晶体后, 最好去大的光源中心(国内不是有上海光源么)采集数据, 当然普通的学校里的X-射线源可能也够好了 (数据分辨率最高可达~1.5A), 看你自己的目标. 5. 有了数据后就是解结构, 这更不是三言两语可以说清楚的... 你得学点基本的LINUX. (用中文解释实在费力, 不知道我有没有翻译错的...) 希望能帮到你