PCR退火与复性区别

你所说的PCR应该就是最常规的PCR,以DNA为模板,通过上下游引物,实现DNA的扩增RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reversetranscription）,尽管有些资料上说实时荧光定量P

58C,如果是有模板的话,58C或再低一些都可以,其实退火温度不需要刻意去要求,一般的PCR,52-60C就可以全解决.

退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素.引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度.引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低.虽然降低退火温度可能增加扩增产量,

荧光定量PCR和半定量RT-PCR都可以用来检测基因的表达量的,但二者检测的东西多少有些不同.荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入可以和双链DNA特异性结合的荧光染料（sybrgreen）或者和目的

PCR这里是指常规的PCR吧?就是以DNA为模板,dNTP为原料,在TaqDNA聚合酶的作用下,扩增DNA.RT-PCR即Reversetranscription-PCR,顾名思义就是讲mRNA通过反

计算退火温度的方法：1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5（oroligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认

分别摸索实验条件测定,根据DNA电泳判断不过其实在做PCR的时候,根据合成的引物中的GC含量可以用公式计算出退火温度,一般比GC计算出的公式低5度比较合适

梯度pcr仪就是可以允许用户在退火步骤时选择同时进行不同的退火温度以筛选最佳退火温度.以wealtec的SEDIG为例,96孔控温模块按照8x12排布,解链步骤设置完后,设置退火步骤时,可以选择“梯度

你做个退火温度的梯度吧!大部分的PCR都有这一功能!退火温度选择一个范围,如50-60度,PCR仪器在一排（12个孔）或一列（8个孔）中每个孔的温度都不同,你在相应的孔中放入待反应的PCR混合液（保证

唉,这种题就是中国特色,完全理论脱离实际.\x0dPCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR.其中,模板的GC含量、模板的组成（单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还

引物的复性温度就是变性温度后一段温度较低的时期,在该阶段,引物单链和变性期已经解链的模板单链结合,这就是引物退火过程,该过程需要的温度就是复性温度.该温度十分重要,可决定PCR的特异性以及扩增效率.

变性温度94℃,退火55℃,延伸72℃,复性37℃.

TM值是在一定buffer盐浓度情况下计算出来的.你需要查一下你的PCR体系里buffer盐的浓度,然后找相应的TM值.不过TM值也是一个估算值,举个例子,以你的正向引物而说,TTACAAGATGGA

软件终归是软件,一个PCR体系的具体反应条件不通过实际运行是无法得知最佳退火温度的.建议你做一个梯度PCR摸索一下最佳退火温度.

1、PCR在体外进行,转录在体内进行.2、PCR时经历3个阶段：94度变性,30-55度退火,72度延伸.转录的话一直是在体温条件下进行的.PCR所用的是耐高温的DNA聚合酶,而体内转录用的是普通的D

RT-PCR与Northernblot的原理我就不说了,因为随便上网的都可以找到.我觉得RT-PCR出现假阳性的可能性还是挺高的,毕竟是PCR的一种,只能作为预测结果.Northernblot才是比较

一般用55°,不行的话用58°,再不行的话就设置从58-55的touchdown

引物的另一个重要参数是熔解温度（Tm）.这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的.在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还

说影响得看情况,退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的.但是,实际上,好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近.有时候,我们可能会通过牺牲特异性的手段（当GC含量过高时,减少引物长度）来平衡两条引物

计算退火温度的方法：1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5（oroligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认