搜搜做题作业网pcr引物需要设计上游引物和下游引物
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/28 20:38:26
Oligodt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链（就
完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你
合成的单链在实验时又一个和模板结合的退火过程,在这个过程中会自动形成茎环结构,如果你的茎环结构设计合理的话.我也在类似文献上看到过上游引物含有额外的碱基,上面有说明的,是为了调整Tm值.上游引物不能全
这是针对逆转录pcr而言,所谓的跨外显子就是一个引物（比如上游引物）、出现在两个外显子交界,那么做RT-PCR时,dna由于2个外显子被内含子隔开,引物就不会起作用了
用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说
使用引物设计软件,如果可以最好找公司设计合成,这样有保证.再问：老师要我们自己设计啦···杯具··再答：挺有难度，到网站上找一些设计原则看看。再问：谢谢啦，已经搞定啦··
FPrimer:5'-TTGTAAAAAAATTAAATTAA-3'RPrimer:5'-CATATTTTAATTAATATTTC-3'你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很
上游：5ggaattcatgtttagtttgaaaaaaac3下游：5gggttcgaattagacattgccaacatatt3你要的并不是鉴定引物,而是扩增引物根本不用软件
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段
一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.
用primerpremie
一、可以使用oligo6或者primer5等软件设计.用这些软件选择引物,主要就是看引物的稳定性,形成二聚体的可能性,退火温度等等参数.二、如果你的序列同源性不高,GC含量也还可以的话,可以使用一些经
NCBI有免费的设计软件非常好用,权威把你的序列贴到最上方的空格就可以了,开始的时候,所有的参数都用系统的默认值就可以,不需要修改.
跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.
上游引物：GAATTCacgcgcaagattagg（后面可以继续加几个碱基,用PRIMER5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KODPLUS的话,就一般引物设计
第一次的引物再用,效果不好,酶需要一些额外片段来结合在模板上,所以第二对引物要靠里.引物不同,能增加特异性,这也是巢式PCR的意义所在啦.看到图片会更好理解哈:hand:
普通PCR规则：1、18-25bp；2、Tm值在45-60；3、2个引物之间没有超过5bp的互补序列；4、CG%在40-60%；5、避免连续出现3个以上的CCC或GGG；6、不要迷信百度.
PCR扩增引物要在目的片段两测150bp位置为宜,这样设计的原因是既可以有效控制扩增产物的大小,因为太长的片读一个测序反应无法得到全场序列,又可以给测序设计内引物留出足够的空间.由PCR特性决定的,不
可以在引物上添加不配对的碱基,但是在引物的3‘端,至少有三个碱基是严格配对的.但是这样的操作主要是为了添加酶切位点或者flag等.Tm值是根据两条链的退火情况来计算,不配对的碱基不算在内,所以你添加不