搜搜做题作业网pcr引物浓度过高
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/27 22:05:19
同楼上,当初我问老师这个问题时,他说大学才学这么深
Oligodt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链（就
完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你
一般PCR使用两条引物,前后各一条,与模版DNA结合上后,前后的引物形成复制起始位点,共同向中间扩增,直到连上,一次扩增完成.
在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列.在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,
用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说
关键就是这个引物的设计,如果你能设计好并且成功RT-PCR,那就没问题了.
把两个目的基因引物浓度和内参引物调成一致的,因为在计算结果时是要和内参基因对比的.
是一段特定的DNA序列,可以在退火温度下和模版链特异性结合,引导PCR体系中的dNTP根据与模版链碱基配对原则延伸出一条新的链．引物的序列是根据你要扩增的DNA序列而设计的．
我使用的引物一般稀释到10μM.20微升体系每个引物加0.4微升即可.你的50微升体系加1微升也不算多.你降低下退火温度试一试.
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段
一小段寡聚的DNA,一般有两个（一对）,分为上游引物和下游引物,分别指导DNA两条链的聚合.它们主要作用有两个,一个是和模板特异性结合来指导taq聚合酶合成所要的片段.一个是提供一个3‘端的－OH末端
一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.
随机引物PCR如果是RAPD的话,是要用单引物的一般是10bp大小的,CG含量要高于60%.
用primerpremie
一、可以使用oligo6或者primer5等软件设计.用这些软件选择引物,主要就是看引物的稳定性,形成二聚体的可能性,退火温度等等参数.二、如果你的序列同源性不高,GC含量也还可以的话,可以使用一些经
NCBI有免费的设计软件非常好用,权威把你的序列贴到最上方的空格就可以了,开始的时候,所有的参数都用系统的默认值就可以,不需要修改.
先blast一下,引物特异性不好再改变条件也没意义引物GC%5‘端或中间高3’低,3’端5个碱基内尽量不要有连在一起的CG且少于3个.引物不要在串联重复区,比如Alu上如果引物没有问题,可以减少引物浓
就是指引物与该匹配的目标模板以很高程度匹配（一般是100%）,衡量值是detaG的绝对值在适度的范围较高.而此引物在基因组其他位置没有配率很高的地方,衡量水平是detaG的绝对值越小越好.这样设计出来
没事,这个可以,你应该是把设计的上下游引物都进行了比对,前两个比对结果应该就是上游、和下游引物,假设你第一个结果是上游,第二个结果是下游.那么第三个结果也就是下游比对结果,下游结合的位置距离上游、下游