PCR引物和目的序列相同还是和质粒相同

因为RT-PCR的模版是单链的RNA,一种引物就够了,而常规PCR的引物是双链DNA,需要上下游引物从两端同时扩增.

引物加的量应该相同,能放在一管里跑最好,但是分开跑也可以接收（一般都是这样）

你这是mRNA序列还是cDNA序列啊?你目的是什么?引物你设计在什么位置,你还是说清楚点吧!再问：要做的是基因的表达，这个基因是从NCBI上直接查询得到的。http://www.ncbi.nlm.ni

前提表述有误,因为DNA复制需要RNA引物,所以PCR才需要人工引入引物.但是该引物绝对不会在目的基因中,它是一段与DNA互补的RNA链,而且与目的基因之外的两端互补.要是与目的基因中的序列互补,PC

使用引物设计软件,如果可以最好找公司设计合成,这样有保证.再问：老师要我们自己设计啦···杯具··再答：挺有难度，到网站上找一些设计原则看看。再问：谢谢啦，已经搞定啦··

正向引物和反向引物是相对的通常以一个双链DNA（上面的那条链）的上游结合部位称为正向引物是从左到右的方向,也就是5-3的方向而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物其方向是从右到左的因为下面的链的方

FPrimer:5'-TTGTAAAAAAATTAAATTAA-3'RPrimer:5'-CATATTTTAATTAATATTTC-3'你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很

上游：5ggaattcatgtttagtttgaaaaaaac3下游：5gggttcgaattagacattgccaacatatt3你要的并不是鉴定引物,而是扩增引物根本不用软件

一定要的.正向引物：5'.CTTCGAAATTC3'反向引物：5'.CCGATCGGGAGA3'回答楼主的补充问题：设计正向引物时,该引物序列应该具有和你待扩增DNA序列接近5‘段处的序列.反向引物设

都是大鼠就可以

你要重新设计引物了有引物2具体有好几个峰,谁也不知道是哪个,是产物的话主要看溶解温度,溶解温度高一般是产物.建议重新设计引物,重做梯度PRC电泳分析.再问：懒得做电泳了，引物是没有问题的，因为是参考文

上游引物：GAATTCacgcgcaagattagg（后面可以继续加几个碱基,用PRIMER5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KODPLUS的话,就一般引物设计

5':CGGAATTCACGCGCAAGATTAGGTGGGG3':CGGGATCCCCTTGGGAAGAAAAAGCAAG引物组成为：保护碱基+酶切位点+目的基因末端序列.由于你要扩增全部这段序列,

一般对于已知序列的PCR当然不要从保守序列来设计引物,只要从开放可读框前后开始设计就行了.需要从保守序列设计引物的情况一般是两种,一是某个物种里面某个特定基因序列从未被分离过,但其进化关系相近的物种有

不是再答：对拓扑异构、长度、碱基比例排列、端处有要求。

PCR的目的是为了扩增目的基因小一点的基因可以直接合成但是大一点的基因就得用PCR扩增了引物是和目的基因的一端互补的单链DNADNN左边一个序列右边一个序列而且DNA的复制只能按照一个方向复制就是由3

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

模板大多数为一条,也可为多条,引物至少两个（三五处复制）启动与终止各一个为模板上公用.

那是显然的,所以在提rna做pcr的时候,如果里面混了基因组dna,那就有可能导致假阳性再问：谢谢，但是这不是我想要的答案。请问做半定量RT-PCR的引物怎么设计？可以设计在基因的非翻译区，然后扩非翻

你说的这个PCR后片段的大小是指你插入到载体中的目的基因长度,还是整个载体的长度啊?你的问题表述的不明白.