目的质粒转化酿酒酵母,以空质粒为对照,PCR验证时为什么空质粒也能P出目的片段

空载体是没有插入外源基因的载体空质粒是没有插入外源基因的质粒,可以说是空载体,但空载体不一定是空质粒

我觉得用elutionbuffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大

不管酶切还是PCR,都是间接的结果.要确定克隆的正确,一定要测序的啊.你测个序,问题就迎刃而解了.到底是什么问题也就清楚了.再问：我前些天去遇到一样的问题，酶切鉴定正确，但测序后什么也不是呢再答：所以

具有相同的粘性末端的两条DNA链在连接酶的作用下相连.只有一种酶切时,切出的粘性末端相同,让目的基因和质粒相连接即可,但是由于是混合,连接的结果不尽相同.DNA连接酶将目的基因和质粒粘性末端的3-5磷

质粒直接表达,质粒一般都在微生物里面,放入生物体内细菌的是不伤害动植物的细菌.

分子水平上,用人工的方法提取（或者合成）不同的生物的遗传物质,在体外切割拼接和重新组合,然后通过不同方法把重组的DNA分子引入受体细胞,使外源DNA在受体细胞进行复制与表达,按人的需要生产不同的产物或

一般的酵母质粒转染是用环状形式来进行的,像酵母双杂交之类的.如果用线性化质粒一般都是为了在酵母中表达蛋白,转入的质粒会整合到基因组上的,仍然是线性.

同种酶酶切两端的粘端相同这样子目的基因有可能正向插入载体也可能反向插入（目的片段两个方向都能与载体连接）但是只有一个方向是正确的

筛选用的.因为基因重组到质粒后需要导入受体细胞进行表达.质粒中有一些是重组的有一些是没有切开或者重组不成功的重新变回原来的质粒.那么筛选的时候如果细菌长出来其中一个抗性另一个不抗性那么可以说明中间被插

1.人的胰岛素细菌的质粒；2.从细菌中取出一种叫质粒的圆环状DNA；3.基因能控制蛋白质合成的表达；4.繁殖速度快的特点.————————附：产生胰岛素的细菌的制造过程：1.科学家从细菌中取出一种叫质

细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体,提取后可用作构建基因表达载体.

你的质粒提出来以后没有经过线性化,因此存在三种形态,超螺旋,单链开环和线性分子,其中只有线性分子可以用maker判断分子量大小,另外两种不行,如果你的质粒提的质量好的话,应该是超螺旋占优势,超螺旋会比

问题描述不清.“同时做对照：质粒酶切回收的产物电转”?也就是说拿线性的质粒去电转做对照?如果是这样,你不如用感受态细胞直接做阴性对照,再用原质粒转化做阳性对照,这样更好分析结果.多克隆位点是很小一段,

用一种限制性内切酶切割质粒和目的基因,加入DNA连接酶,形成重组DNA分子

如果是双酶切,而且两个酶切位点不能形成自连,那么插入目的基因也只能获得一种重组质粒.如果是单酶切,或者双酶切的两个酶切位点是同尾酶,那么插入目的基因能获得两种重组质粒.

构建之后,这三种情况都是存在的,然后先把这所有的全部导入细胞（当然不是同一个细胞）,在质粒上会有某种抗性基因,就加入这种抗性基因（比如它抗某种抗生素,就加入这种抗生素,含目的基因—目的基因的这种重组片

不一定,可以是同种细菌的质粒.再问：只要有不同于宿主细胞质粒的标记基因用于鉴别就行了吗？再答：是的再问：也就是说不可以用宿主细胞里的质粒插入目的基因对吗？再答：对的，因为你们现在学习的内容不会出现：在

跑胶看大小啊,如果是转到了细菌中,就用目的基因的引物做PCR,能P出来的就是

“单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒”,首先你的表达有误,单酶切可以切开,说明目的基因有连接上,那么重组载体该是比空载大的.质粒稀释100倍后PCR,有目的条带,也说明了是阳性克隆.有拖带,

质粒有环状线型和超螺旋三种状态,因为二级结构不同所以电泳中跑得快慢不一,超螺旋最快线型第二环状最慢,而空质粒是线性的其条带位置与Marker位置相符,其他两种分别在其上下两侧,你的样品大多都是三条带,