泳道中质粒DNA有几条带,为什么?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/26 13:53:21
一般程序如下:获得目的基因-准备表达载体-将目的基因插入表达载体中(测序验证)-转化表达宿主菌-诱导靶蛋白的表达-表达蛋白的分析-扩增、纯化、进一步检测.[主要试剂主要试剂]主要试剂1、LB培养基.2
那就是PCR的问题了,建议用新的试剂再试下,最好先把反应液,酶,引物按比例先配好,再取混合液加引物
我觉得用elutionbuffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大
T_DNA(可转移DNA)
酵母菌也有质粒,质粒是DNA,原核生物的遗传物质是DNA但不是都叫质粒.
TE为含EDTA的Tris-HCl(PH8.0)缓冲液:其中比较关键的成分是EDTA,日常环境中不可避免的存在DNase,而DNase的活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活.镁离子存在条件下
博凌科为N96快速质粒DNA提取试剂盒,高通量快速小量抽提质粒.该试剂盒通过异丙醇沉淀的原理纯化得到的质粒DNA.本试剂盒采用本公司特制的96孔过滤板和溶液III能够快速高效的提取到高纯度的质粒DNA
这样看你的OD值是多少,太低的话跑胶不一定能看到条带.除此之外,还可以检查一下你跑胶过程中是不是有问题,比如说没有加EB,电泳方向是否正确,DNA样品过度稀释,凝胶成像系统有问题等等.
用酚氯仿再次抽提.若对去除基因组DNA有要求,那么用核酸外切酶处理.再问:能不能再详细点???谢谢
是的.质粒都是环状的DNA分子.质粒主要存在于原核细胞中,但是真核细胞也有,比如酵母菌.
因为质粒是环状的DNA片段,具有自动整合能力,也就是说,只要让质粒进入细菌细胞内后,就万事OK了,他会随着细菌DNA的复制偷偷的自己整合进去.而让他进入细胞的关键就是用钙离子溶液,使他变成感受态细胞,
碱性条件下,染色体DNA双螺旋结构解开而变性,质粒DNA的氢键断裂但两条互补链彼此缠绕.恢复中性时,染色体DNA难以复性,质粒DNA分子很快复性,离心时染色体DNA与细胞碎片一起被沉淀出来,而质粒DN
我硕士专业是分子生物学这方面的,我可以很负责地告诉你,质粒DNA分子具有三种构型:共价闭合环开DNA(cccDNA,SC构型)、开环DNA(OC构型)和线性分子(L构型).在细菌体内,质粒DNA是以负
Mitochondrial DNA (mtDNA) is the circulated double-stranded DNA&n
PCR扩增的结果和模板的质量有直接的关系,在PCR扩增中如果模板纯度高,很低的量都可以进行扩增的.提取细菌的DNA量不多但纯度高,即使DNA电泳检测不到条带,PCR仍然能扩出条带.希望你看明白了.
你那叫弥散性条带.你上样量太多了吧.
影响转化效率的因素很多,主要有:感受态细胞制备的质量、受体菌生长期(大肠杆菌在对数生长期易产生感受态)、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间(延长冰浴时间可略微提高转化率)
以东盛生物的为例bufferP1:除去RNAbufferP2:裂解细胞bufferP3:沉淀DNAbufferWA、bufferWB:都是洗涤液(这两个之间有什么区别我也不清楚)TE:溶解DNA.
请问蛋白marker染出来没?如果maker都没染出来,加上考马斯亮蓝染色液重复使用的话,八成是染液出问题了,我就遇到过这样的情况,重新配下染色液,过滤后再染胶试试看.(前提是Loadingbuffe