植物提取的DNA有糖类污染如何去除
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/14 19:43:03
蛋白污染会在电泳孔有亮带,跑不出来.RNA污染会在最下边,一团弥散的亮带,但DNA如果降解的话也有这种现象.
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性.在液氮
一般操作问题只会影响到浓度高低,如果根本没有,那可能试剂有问题,试剂配置?酸碱度?严格按照要求步骤来一遍.还有一步细节,分层后吸上清液时宁可少吸也不要吸到下层有机溶剂,否则Dna肯定没了
博凌科为新型快速植物基因组DNA提取试剂盒改进的CTAB植物DNA抽提液(添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质,上清加入异
(1)可以的,液氮冷冻更容易破碎细胞壁释放DNA,但是不冷冻也没关系的,提取的DNA量即使少点也足够满足试验要求.(2)-20度足够保存,用一年以上都没问题,超低温保存时间当然更长,但是切忌反复冻融,
OD260的吸收值不仅仅是DNA,还包括RNA的光吸收.你用RNA酶降解后,OD260值肯定会降低,因为RNA没有了;同时,你使体系中的蛋白量增加了一些,就使OD280的值增加了.两方面综合起来,结果
取出少量样品用特异性酶切,检查大分子是否还在(uv或者电泳),确认.用紫外分光光度计扫描,计算A260/A280之比值,如果大于1.8说明RNA污染,如果小于1.8有蛋白污染.(原理这里不讲了太费时间
原理就是去掉植物细胞壁细胞膜质体线粒体叶绿体剩下细胞核了.就是DNA了
干燥的叶片和湿润的叶片提取NDA方法是一样的.1.将叶子剪碎,放入研钵中然后加入液氮快速研磨至粉末状,然后用DNA提取液倒入研钵再研磨,再是离心.后面不同实验不同方法了.再问:好的谢谢还有就是研钵没有
在两个外显子上设计上下游引物就可以再问:跨外显子是吗?再答:是的,在相邻的两个外显子上就好。
下游做PCR的话,应该保证模板的纯度,CTAB法提取多半会得到浓度不错但纯度不够的DNA,建议将得到的DNA进行纯化,或者直接使用试剂盒提取,现在的国产试剂盒都还不错的,节约时间又不贵
栉水母游动的时候能发射出蓝色的光;霞水母闪耀着微弱的淡绿色光芒再问:谢谢,那如何提取DNA?想了解一下再答:常规提取方法,可登录生物资源网查询详细步骤
放在超净台里做.超净台是无菌环境.其实我们做环境微生物的提取DNA都没有处理空气细菌的,空气中的细菌肯定是和水里的细菌有一部分是混合的,除非那个水原来不是和空气接触的.
蛋白污染可以考虑用酚氯仿多抽提几次,记得吸上清的时候小心点,宁可浪费也别吸到界面.一般后续还需要用氯仿/异戊醇抽提来去除酚.这样基本蛋白污染就可以去干净.实在不行,抽提一次后,就用蛋白酶K消化30mi
提取的时候饱和酚,氯仿需要定量,这些可以去蛋白.去除RNA污染,RNA酶活性,定量.凝胶电泳,试剂最好是即用型的,因为有些东西放久了会长菌.然后是染料的热稳定性和灵敏度.
不能直接加CTAB,只有充分研磨成干粉后在加CTAB,如果直接加CTAB,由于植物中水分和糖分多,成粘稠状不易被充分研磨.DNA也不能充分释放,还容易导致DNA断裂降解等.
先将植物细胞用纤维素酶和果胶酶处理,得到没有细胞壁的原生质体,然后把原生质体放入蒸馏水中使其胀破,然后进行离心,分离出叶绿体(比较明显,一层绿色的),然后把分离得到的叶绿体打碎(用搅拌机),把打碎后的
测OD的方法是测不出RNA污染的,因为RNA的260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取
直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了.
真菌的细胞成分和植物是有差别的,这种专一性的植物DNA提取试剂盒不一定能提好真菌的DNA.如果有条件你最好是买专一性的真菌DNA提取试剂盒.不过植物DNA提取的CTAB法确实可以适用于真菌的DNA提取